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Wyatt Technology Corporation, leader mondial de l’instrumentation et des logiciels pour la caractérisation absolue des macromolécules, publie une nouvelle note d’application présentant une étude réalisée par Florida State University. Rédigée par Tsz Kin Martin Tsui, Claudius Mundoma et Li Hong de la Florida State University, cette publication montre comment le système de diffusion de la lumière dynamique (DLS) Wyatt DynaPro peut servir à caractériser l’homogénéité et la stabilité d’un complexe hétérodimèrique de protéines (HPC) dans diverses conditions de tampon. Les résultats démontrent que le pH des solutions tampon influe sur l’homogénéité de l’échantillon et sur sa stabilité. Pour obtenir une copie de l’étude, s’il vous plaît cliquez ici ici ou visitez la bibliothèque de notes d’application disponible sur www.wyatt.com.

Un complexe hétérodimèrique de protéines (HPC) de Pyrococcus furiosus est identifié pour son rôle fonctionnel dans la liaison avec l’ARN. Ce complexe a un poids moléculaire total de 65 kDa et a tendance à former des fibrilles in vitro, tel qu’observé en microscopie électronique. Les données de DLS ont été acquises à 20° C, en utilisant le système Wyatt DynaPro NanoStar. Dix mesures ont été effectuées pour chaque échantillon ; la stabilité et l’homogénéité, déterminées à partir des fonctions d’autocorrélation et de la polydispersité, ont fourni des informations sur les propriétés biophysiques du complexe.

Hong Li, du Département de Chimie et Biochimie et l’Institut de Biophysique Moléculaire, de Florida State University, dit "les macromolécules biologiques, leur forme, fonction, interactions et mécanisme d’action, sont l’objet principal de recherche de l’Institut. La caractérisation des interactions entre les protéines et les membranes, les sucres ou les acides nucléiques est un travail intéressant pour nous. Le DynaPro NanoStar est idéal pour l’étude de ces complexes en plus d’études sur des nanoparticules, des vésicules, des virus et des colloïdes. Les résultats de l’étude démontrent que le pH des solutions tampon influe sur l’homogénéité de l’échantillon et sur sa stabilité, tout en permettant de voir les conditions où la polymérisation du HPC est thermodynamiquement plus favorable."

L’Institut de Biophysique Moléculaire a une longue histoire en tant qu’unité de recherche interdisciplinaire unique dédiée à l’application des principes physiques et chimiques à l’étude des phénomènes biologiques. Dr Claudius Mundoma est le directeur de l’établissement de Biochimie Physique qui abrite un large éventail de techniques de biophysiques utilisées pour la caractérisation macromoléculaire de structure des macromolécules. Il commente : « une technique telle que la diffusion dynamique de la lumière est très efficace, exige moins de temps et échantillon que d’autres techniques pour déterminer les distributions de taille de particules et les états d’agrégation des molécules. » Les applications comprennent des recherches pour améliorer la production de vitamine C ou pour recréer des virus pour la livraison efficace de thérapies géniques aux personnes atteintes de maladies héréditaires.

Tsz Kin Martin Tsui, commente : « l’instrument est simple à utiliser et peut être utilisé pour un large éventail d’applications nécessitant précision et haute sensibilité, y compris pour des études sur le repliement des protéines, sur les assemblages dans de plus grandes structures, sur la stabilité et les équilibres dynamiques de ses assemblages. Les résultats de cette étude peuvent me servir pour améliorer la préparation des échantillons en utilisant les conditions de tampon appropriées pour les études biophysiques, ce qui est particulièrement important pour l’analyse structurale. »

Le système DynaPro NanoStar de Wyatt Technology est un des instruments de diffusion dynamique de la lumière les plus largement utilisés pour l’analyse des protéines en solution, des tampons eux-mêmes ou de leur effets, ou d’autres produits en solution. Depuis sa introduction au début des années 1990, il est devenu un outil indispensable pour la caractérisation des biomolécules.

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